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本制品百奥莱博公司基于荧光PCR技术开发的，专门用于疑似病例血液样本中甲型肝炎病毒核酸研究检测的试剂盒。

• 本试剂盒仅用于体外研究检测用，操作人员必须经过培训，试剂盒使用前请仔细阅读说明书全文。
  
• 不要使用过期组分，不同批次的试剂盒组分不可混用。
  
• 使用时尽量避免反复冻融，冻融应不超过5次，否则建议分装后使用。
  
• 样本采集和处理过程应遵循生物安全管理要求。
  
• 荧光PCR实验严格分区操作，各区应有专用的手套、移液器等，不得交叉使用，避免污染；工作人员应遵循单方向工作原则，各工作区相对隔离。
  
• 测试样本时，应做好生物安全防护。
  
• 实验完毕后，使用过的试剂盒、样本和试剂应进行无害化处理。

• 样本采集：样品的采集按照相关标准要求进行。
  
• 核酸提取：可使用合适的商业化核酸提取试剂盒，并按照其使用说明进行操作。
  
• 试剂准备：从试剂盒中取出反应液、酶混合物，完全复融并振荡混匀后，瞬时离心。
  设所需要的PCR反应管数为N（N＝样本数＋1管阴性对照＋1管阳性对照），配制加样如下表所示，瞬时离心后尽快扩增检测。
  

  成分	用量
  甲型肝炎病毒反应液	14μL×N
  甲型肝炎病毒酶混合物	1μL×N
  样本核酸/阴性对照/阳性对照	5μL×N

  • 建议将所需量反应液和没混合物按反应总数量＋1预混合后分装到PCR管中，每管分装15μL。
    
  • 由于阳性对照浓度较高，建议最后在样本制备区域加入阳性对照。
• qPCR反应：
  

  过程	温度	时间	循环数
  产物消化	45℃	10min	1
  预变性	95℃	10min	1
  PCR扩增	95℃	15sec	40
  	60℃	45sec

  • 在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。
    
  • 使用ABI品牌仪器时，需将淬灭基团改为NONE，请勿选择ROX参比荧光。
• 实验成立判断条件：
  
  • 阴性对照：不应产生任何的扩增曲线。
    
  • 阳性对照：产生扩增曲线。
    
  • 以上条件同时满足，否则此次实验视为无效。
• 结果判定：
  

  	Ct值≤35	无Ct值	35＜Ct≤40且有明显扩增曲线
  FAM	阳性+	阴性-	可疑样本

  对于可疑样本，重新提取核酸，再次进行对应的PCR检测。如果重复结果Ct值≤40且出现对数扩增曲线判为样本阳性；否则判为样本阴性。